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广西快三预测与推荐:常見HPLC峰拖尾原因及解決方法

文章出處:永昌眼鏡 人氣:-發表時間:2015-08-02 10:05

幸运28蛋蛋计划 www.zocjs.com  峰形拖尾有常見幾種原因:色譜柱問題、化學原因、還有儀器問題。  

 

  最通常的峰拖尾原因是額外柱展寬,柱床的損壞,分析物和填料上活性位點的相互作用,顯然必須根據拖尾的原因才能去做針對性的工作。 

 

 

  怎樣判斷拖尾的原因? 

 

 

  最快的方法就是仔細觀察你的色譜圖。色譜圖能給你很多關于問題原因的信息,而且不需要知道樣品和色譜條件。然后你利用一些其它的信息來證實由色譜圖得到的信息得到的推斷。 

 

 

   最先要觀察的就是峰高。如果是用UV檢測器,峰高在1 AUFS的數量級上,那么可能是由于過載造成的峰形拖尾。判斷假設化合物的消光系數是在1000的數量級上,一個很合理的經驗法則。為了確定質量過載,你需要知道色譜柱上的樣品量是多少。通常,孔徑在100 Å左右的多孔填料上樣量約100µg時會出現過載導致的扭曲峰形。 

 

 

   這些雖然都是經驗法則,但是它們可作為判斷樣品過載合理指導方法。你可以進1/10的量來測試過載,看峰形是否有所改變。 

 

 

   如果進少量樣品時就發生拖尾該如何解決? 如果圖上有很多峰,觀察峰形是否大致不變,或者有相同情況的改變。如果保留時間短的峰拖尾要比保留時間長的峰拖尾嚴重,那么可能是色譜柱死體積的原因。柱死體積影響會隨著峰形變寬而減小,也就是它對先出的峰的影響比后出的峰的影響更大。兩種死體積的情況需要被考慮到: 

 

 

 

   1.額外的柱展寬效應

 

   2.檢測器的時間常數 

 

   管路、進樣器和檢測器的擴散展寬會導致色譜圖上先出的峰拖尾。如果你把細內徑的色譜柱用在一臺常規分析儀器上,或者你最近重新連接過系統,你就有可能會遇到這種情況。如果是后一種情況,那么檢查你所使用的管路(從進樣器到檢測器的管路內徑應該是9/1000"),同時檢查所有的接口,看它們是否完好。通常接口擴散的主要原因是不同的色譜柱制造商使用不同的接口深度。對于接口擴散有一個偏離標準,僅僅15 µL偏差在5 µm色譜柱上流經3 mL體積的流動相就能明顯影響到色譜峰形。 

 

   較大的檢測器時間常數也會有相同影響。出峰較早的拖尾會比出峰晚的拖尾更明顯。通常,默認的時間常數設定是1秒。如果使用一根5 μm高性能的色譜柱,可以看到色譜峰會拖尾延長(由2 min延至3 min)。更大的時間常數能看到更為明顯的影響。

 

   如果色譜圖中所有化合物的峰形都出現十分明顯且相同程度的拖尾,可能是由于以下兩種原因: 

 

    1. 柱床損壞; 

 

   2. 所有樣品組成具有相同的化學性質,我們將處理這種化學影響。 

 

   第一種情況,按照標準條件,特別是根據廠商推薦的條件進行理論塔板數測試,可以判斷色譜柱是否損壞。色譜柱可能是由于吸附了臟雜質或顆粒而被破壞。有時,可以通過一些合適的溶劑(如用于反相色譜柱的四氫呋喃)來去除這些臟的雜質,但如果是柱床本身變化,就沒有其他辦法可以修復柱子了。

 

   如果是所有色譜峰化學性質相似,那么化學效應可能是造成拖尾的潛在因素。如果僅僅是一些峰出現拖尾,而另一些峰具有良好峰形,化學效應是造成峰拖尾的主要原因。

 

   上面提到的“化學效應”指什么? 

 

   通常有幾種效應,但最常見的原因是分析物與不均勻的填料表面發生比較大的相互作用。典型的例子就是強堿性化合物在一些反相填料上發生拖尾。這類型的化合物能與填料表面殘留的硅醇基及鍵合相發生了強的相互作用。如果殘余的硅醇基在填料表面形成了非常不均勻的分布,就會導致拖尾。

 

   如何消除因化學影響造成的拖尾?

 

 

   首先,你應該考慮選擇一款不會出現這種現象的色譜柱。一些新的反相填料就是專為堿性化合物的拖尾最小化而設計的。其次,這種拖尾現象能被控制,通過調節流動相的pH值或者在流動相中使用堿性有機溶劑來競爭化合物的活化位點。這是因為硅醇基作用通常是離子交換。在酸性條件下,很少的硅醇基帶負電,所以可以觀察到帶正電的分析物拖尾現象會減弱。三乙胺經?;嶙魑赫約釷褂?。然而,在這些競爭性堿中,疏水性更大的物質通常效果會更好,如:辛胺,四丁基鹽。

 

 

   有一種情況殘余硅醇基與分析物之間的相互作用并不是離子交換作用,而是氫鍵作用,你可以改變氫鍵作用的溶劑來改善峰形。如:甲醇與乙腈相比,更能改善峰形,可作為流動相中有機溶劑添加劑。類似的情況在正相色譜中也會遇到,可以用相似的原由來減少拖尾。通過改變醇類或乙腈作為流動相中極性的添加劑可以觀察到拖尾現象的顯著變化。

 

   峰形拖尾也會因其它一些原因造成,但相對較少。樣品組份堵住色譜柱篩板或者進樣器部件也會造成拖尾?;箍贍蓯欠治鑫鐫諫追治齙墓討諧魷至嘶Ц謀?,這種情況可能是化合物發生降解或者是被分析物不同的分子形式之間的緩慢平衡。

 

 

 

 

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